霉菌不是細(xì)菌,它要“氧氣、潮濕、偏酸、25℃左右”才長(zhǎng)得歡。霉菌生化培養(yǎng)箱若把溫度、濕度、換氣、光照其中任何一項(xiàng)調(diào)錯(cuò),輕則孢子不萌,重則整個(gè)平板被雜菌搶占。下面介紹培養(yǎng)箱開(kāi)機(jī)前各項(xiàng)參數(shù)的檢查說(shuō)明: 一、溫度
霉菌最適生長(zhǎng)溫度24–28℃。箱內(nèi)風(fēng)機(jī)若直吹培養(yǎng)皿,皿蓋會(huì)局部失水,瓊脂出現(xiàn)“干裂環(huán)”。
檢查:把0.1℃精度溫度計(jì)放在擱板中央,關(guān)閉玻璃門(mén)10 min,讀數(shù)漂移>0.5℃時(shí),用錫箔紙折3 cm高擋風(fēng)片,貼在風(fēng)扇口,讓氣流改向側(cè)壁循環(huán)即可。
二、濕度
多數(shù)培養(yǎng)箱自帶超聲波加濕器,設(shè)定88%RH即可。
檢查:先跑空箱30 min,觀察頂部是否掛水珠;如有,把濕度下調(diào)2%RH并在內(nèi)壁貼一層0.5 mm吸水紙,水珠被紙毛細(xì)管吸走,避免滴落造成“衛(wèi)星菌落”。
提示:箱內(nèi)放水盤(pán)已過(guò)時(shí),水面面積小,RH波動(dòng)大;優(yōu)先用外置加濕器+內(nèi)循環(huán)風(fēng)道。
三、換氣
霉菌好氧,但箱內(nèi)CO2>0.5%時(shí)菌絲變細(xì)、產(chǎn)孢延遲。
檢查:確認(rèn)箱體后下方有“自動(dòng)換氣”菜單,設(shè)定抽氣時(shí)間。手動(dòng)可拔硅膠塞,用計(jì)時(shí)器5 min后塞回,誤差控制在10 s內(nèi),避免箱內(nèi)溫度下跌>1℃。
四、光照
曲霉、青霉的菌落顏色是鑒定依據(jù),200 lx以上白光會(huì)誘導(dǎo)色素變異,黃曲霉由“黃”變“白”,給后續(xù)鏡檢挖坑。
檢查:用黑膠布封住觀察窗;若必須查看,開(kāi)紅色LED,霉菌對(duì)紅光不敏感,可安全觀察30 s。
五、防交叉
霉菌孢子<5µm,隨氣流飄。同一箱內(nèi)若同時(shí)培養(yǎng)細(xì)菌,細(xì)菌平板邊緣24 h就能長(zhǎng)出真菌。
檢查:
上層放霉菌,下層放細(xì)菌,氣流方向自上而下,減少沉降污染。
所有平板倒置(蓋在下),避免冷凝水落回菌面。
用3 M微孔封口膜沿皿蓋縫貼一圈,既透氣又擋孢子,開(kāi)蓋計(jì)數(shù)時(shí)撕掉即可。
六、快速驗(yàn)證
每次實(shí)驗(yàn)順手倒3個(gè)PDA空白平板,一同進(jìn)箱。若48 h后指示皿無(wú)菌,說(shuō)明箱內(nèi)潔凈;若長(zhǎng)雜菌,立即停箱,用75%酒精+紫外30 min聯(lián)合滅菌,再重啟實(shí)驗(yàn)。